¿Qué es y cómo se aplica el PCR?

Tuesday, May 19, 2020
La PCR es una técnica de biología molecular altamente sensible, específica y versátil para detectar cantidades de un cierto ADN específico y posibilitando su fácil identificación.
Aquí te comentamos los pasos del ciclo, así como los equipos e instrumental utilizados para la realización de esta técnica.

Proceso para la aplicación de técnica de PCR


Los estudios de biología molecular incluyen los análisis en que el material de interés son los ácidos nucleicos: ADN y ARN.

Estas metodologías se aplican con diversos fines, como:

  • La identificación de individuos,

  • El monitoreo de tratamientos,

  • El establecimiento de diagnósticos,

  • La detección de bacterias y virus,

  • La determinación de carga viral, y

  • El estudio de mutaciones y polimorfismos génicos, entre otros.

Kary Mullis a mediados de los años 80, redescubro una nueva técnica que hizo posible la síntesis de grandes cantidades de un fragmento de ADN; PCR son las siglas en ingles de Polymerase Chain Reaction (PCR) o Reacción en Cadena de la Polimerasa.

La PCR es una técnica de biología molecular altamente sensible, específica y versátil para detectar cantidades de un cierto ADN específico y posibilitando su fácil identificación.

Cuando se lleva a cabo la reacción de PCR se “simula” lo que sucede en una célula cuando se sintetiza el ADN y en el tubo se mezclan todos los ingredientes necesarios para hacerlo: la polimerasa, el ADN del organismo a estudiar –donde se encuentra el fragmento que se quiere sintetizar–, los oligonucleótidos (llamados también primers, iniciadores, cebadores, “oligos”, etc.) necesarios para que se inicie la transcripción, dinucleótidos (dNTPs), y las condiciones para que la enzima trabaje adecuadamente (cierto pH, determinadas cantidades de magnesio en forma de MgCl2, KCl, y la posibilidad de necesitarse diferentes sales o reactivos, dependiendo de cada polimerasa).

La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un pedazo o fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, proviene de la bacteria Thermus aquaticus [que vive a altas temperaturas 79°C a 85°C], de ahí su nombre comercial más conocido: taq polimerasa. Su “número de copias” se logra en forma exponencial a través de repetidos ciclos de diferentes periodos y temperaturas de incubación en presencia de esa enzima ADN polimerasa termoestable.

PCR es una técnica de biología molecular altamente sensible, específica y versátil


Los pasos del ciclo son los siguientes:

Desnaturalización

Separándose las dos cadenas por ruptura de los enlaces de hidrógeno. Las condiciones típicas de desnaturalización son 95ºC por 30 segundos, o 97ºC por 15 segundos;


Alineamiento 

La segunda reacción consiste en la hibridación de los primers. Para ello se baja la temperatura y las condiciones serán tales que se facilitará la unión de los primers a las cadenas. El rango de actividad de las enzimas varía en dos órdenes de magnitud entre 20°C y 85ºC. Las temperaturas de alineamiento en el rango de 55°C a 72ºC genera buenos resultados.


Extensión 

La tercera reacción se efectúa a 72ºC, temperatura a la cual, la polimerasa lleva a cabo su acción, insertando los diferentes nucleótidos complementarios en el orden que le va indicando la cadena que actúa como molde.

Los tres pasos anteriores constituyen un ciclo. La repetición de este ciclo permite obtener, como resultado amplificaciones, así se obtienen en cuestión de horas, millones de copias de la secuencia deseada del ADN.

Esta técnica tan ingeniosa tiene muchísimas aplicaciones distintas y se ha convertido en una herramienta muy importante en la biología molecular.


En la actualidad existen diferentes variantes de la técnica tradicional de PCR y se puede ver son diversos y puede ser opcional [en algunos casos] el instrumental [libre de contaminantes] y equipos necesarios para hacer este tipo de procedimientos entre los que destacan:

  • Placas, tiras de microtubos o microtubos individuales

  • Kits de reacción

  • Micropipetas

  • Puntas

  • Termocicladores

  • Gradillas para microtubos y gradillas enfriadoras [PCR Cooler]

  • Termomixer

  • Centrífugas

  • Agitadores

  • Guantes

  • Descontaminantes de superficies

  • Estaciones de trabajo para PCR

Todo lo que necesitas para el desarrollo de esta técnica lo puedes encontrar en la amplia oferta que Viresa tiene para ti, desde equipos automatizados hasta instrumental básico.

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