Aplicación y uso correcto de sensidiscos en la prueba de sensibilidad antimicrobiana, método de Bauer-Kirby.

Los discos Sensi-Disc de la marca BD se utilizan para pruebas semicuantitativas de sensibilidad in vitro, están impregnados de antibióticos los cuales se colocan en la superficie de las placas de agar de Mueller Hinton y de esta manera se puede comprobar la sensibilidad en los microorganismos. Miden 6 mm y se preparan impregnando papel absorbente de alta calidad con cantidades exactas de antibióticos o de otros agentes quimioterapéuticos. Los discos están marcados claramente en ambos lados con letras y números que indican el agente y el contenido del fármaco. El contenido del fármaco en los discos se determina mediante los métodos establecidos por la FDA o por métodos similares o comparables a los publicados en el Federal Register de Estados Unidos.

Los cartuchos deben ser utilizados en los dispensadores BBL Sensi-Disc, que incluyen un dispensador de un solo disco, un dispensador de 8 posiciones para placas de Petri de 90 mm.

Procedimiento  de la prueba de sensibilidad antimicrobiana

1. Preparación del inóculo con cultivos de control y de prueba.

a. Realice una tinción de Gram. Utilice únicamente cultivos puros. 

b. Seleccione de tres a cinco colonias parecidas y trasládelas con una aguja o asa de inoculación a            4 – 5 ml de caldo adecuado, como caldo de soja Trypticase (o caldo de Mueller Hinton para microorganismos de crecimiento exigente). 

c. Método de la suspensión directa: Prepara una suspensión directa en caldo o solución salina de colonias seleccionadas de una placa de agar que haya sido incubada una noche (se debe utilizar un medio no selectivo para H. influenzae y N. gonorrhoeae, tal como el agar sangre o el agar chocolate. 

d. Diluya, si es preciso, para obtener una turbidez equivalente a la referencia de turbidez 0,5 de McFarland. Utilice caldo o solución salina estéril como diluyente. Otra opción es normalizar el inóculo fotométricamente; para facilitar el ajuste del inóculo de organismos de crecimiento rápido, puede utilizarse el sistema de inoculación Prompt (dispositivo volumétrico para la preparación del inóculo).

Los caldos de cultivo preparados el día anterior no se deben utilizar como inóculo.

2. Inoculación 

a. En el plazo de 15 min, sumerja una torunda de algodón estéril en el inóculo ajustado correctamente y gírela varias veces contra la porción superior de la pared interna del tubo para exprimir el exceso de líquido. 

b. Siembre tres veces toda la superficie de una placa de agar de Mueller Hinton (u otro agar apropiado) girando la placa a 60° después de cada siembra para obtener una inoculación uniforme. 

c. La tapa puede dejarse entreabierta entre 3 – 5 min., pero no más de 15 min., para permitir que se absorba toda la humedad de la superficie antes de que se apliquen los discos impregnados con el fármaco.

3. Aplique los discos 

a. Seleccione los discos apropiados

b. Mediante un dispensador BBL, empleando precauciones asépticas. Deposite los discos de modo que los centros queden a no menos de 24 mm de distancia. Es preferible depositar los discos de penicilina y cefalosporina de manera que no queden a menos de 10 mm del borde de la placa de Petri y sus centros estén a no menos de 30 mm de distancia. Evite colocar tales discos adyacentes. Para H. influenzae, N. gonorrhoeae y S. pneumoniae no utilice más de nueve discos por placa de 150 mm o cuatro discos por placa de 90 mm. Si los discos se han colocado en el agar con dispensadores que no sean de autoapisonamiento, presiónelos contra la superficie con una aguja o una pinza estériles.

4. Incubación 

 En un plazo de 15 min., coloque las placas, con el agar hacia arriba, en una incubadora a 35ºC. Se deben incubar las Haemophilus spp., N. gonorrhoeae, S. pneumoniae y otros estreptococos en una atmósfera enriquecida con CO2 al 5%.

5. Examinar

Examinar las placas después de un período de incubación de 16 – 18 h (20 – 24 h para N. gonorrhoeae, S. pneumoniae y otros estreptococos). Se recomienda incubar durante 24 h Staphylococcus spp. para detectar los estafilococos resistentes a la meticilina/nafcilina/oxacilina y Enterococcus spp. para detectar resistencias a la vancomicina. 

6. Medición de halos

Alrededor de los discos que contienen antibióticos a los cuales el microorganismo en estudio es susceptible, aparecen zonas de inhibición: halos. Los diámetros de estas zonas se deben medir cuidadosamente por la parte posterior de la placa con una regla. Si es necesario, ubicar la placa a contraluz o utilizando una fuente de luz brillante. Las mediciones se realizan con una aproximación de 1 mm y el operador debe tener la precaución de observar la placa siguiendo una vertical directa para evitar una lectura errónea de las marcas de la regla por el efecto de paralaje.

7. Interpretación de los resultados: 

Se lleva a cabo relacionando los diámetros de las zonas de inhibición y la CIM que le corresponde para el antibiótico ensayado según el cuadro que le proporcione el instructor.

Almacenamiento correcto de sensidiscos

1. Al recibir los discos, almacénelos a una temperatura entre -20 °C y +8 °C. Si el refrigerador del laboratorio se abre y cierra con frecuencia y no se mantiene una temperatura adecuada, guarde sólo la cantidad que se va a utilizar en una semana. Algunos discos (por ejemplo, ß-lactámicos) deben mantenerse preferiblemente congelados a -20 °C. 

2. Permita que los envases lleguen a temperatura ambiente antes de abrirlos. Devuelva al refrigerador los discos que no hayan sido utilizados cuando se haya terminado la aplicación de los mismos. 

3. Utilice primero los discos cuya fecha de caducidad sea más próxima. 

4. Deseche los discos que ya han caducado. También se deben desechar los cartuchos de los que se han sacado discos con frecuencia durante una semana y los discos que se hayan dejado en el laboratorio fuera del refrigerador toda la noche; de no ser así, se debe averiguar su rendimiento aceptable antes de volver a usarlos.

 5. Si los discos forman zonas incorrectas con los organismos de control recomendados, todo el procedimiento debe ser evaluado; el tamaño defectuoso de la zona puede deberse al disco, la inoculación, la preparación o profundidad del medio (alrededor de 4 mm) o a otros factores. La fecha de caducidad sólo se aplica a los discos almacenados en el envase intacto en la forma indicada. Los discos de envases abiertos pueden utilizarse mientras que obtengan las zonas de inhibición correctas con las cepas de control de calidad.

La marca BD cuenta con gran cantidad de sensidiscos para lograr con éxito este método tan utilizado en diferentes industrias.

A continuación se mostrarán los códigos de cada uno.

¡Viresa, Contigo, unidos por la ciencia.!

Linkografía:

https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=31851

https://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1017-85461999000100010

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp8.pdf

(PRATS, 2015)

https://www.freepik.es/search?dates=any&format=search&page=1&query=microbiologia&sort=popular